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技術資料-薄層層析常用顯色劑配制及顯色方法
服务类别:化工相關
服务城市:全國
服务说明

碘:
適用于不飽和或者芳香族化合物
配制方法:在100ml廣口瓶中,放入一張濾紙,少許碘粒。 或者在瓶中,加入10g碘粒,30g硅膠

高錳酸鉀
適用于含還原性基團化合物,比如羥基,氨基,醛
配制方法 1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH + 200mL . 使用期3個月

磷鉬酸(PMA)
廣譜
配制方法 10 g of 磷鉬酸+100 mL 乙醇

紫外燈
適用于含共軛基團的化合物,芳香化合物

硫酸鈰
生物堿
配制方法:10%硫酸鈰(IV)+15%硫酸的水溶液

氯化鐵
苯酚類化合物
配制方法:1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.

桑色素(羥基黃酮)
廣譜, 有熒光活性
配制方法:0.1% 桑色素+甲醇

茚三酮
適用于氨基酸
配制方法:1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸

二硝基苯肼(DNP)
適用于醛和酮
配制方法:12g二硝基苯肼+ 60mL 濃硫酸 + 80mL + 200mL 乙醇

香草醛(香蘭素)
廣譜
配制方法:15g 香草醛 + 250mL 乙醇 +2.5mL 濃硫酸

溴甲酚綠
適用于羧酸,pKa<=5.0
配制方法 :在100ml乙醇中,加入0.04g溴甲酚綠,緩慢滴加0.1MNaOH水溶液,剛好出現藍色即至。

鉬酸鈰
廣譜
配制方法:235 mL + 12 g 鉬酸氨 + 0.5 g 鉬酸鈰氨 + 15 mL 濃硫酸

茴香醛(對甲氧基苯甲醛)1
廣譜
配制方法:135 乙醇 + 5 mL 濃硫酸 + 1.5 mL of 冰醋酸 + 3.7 mL 茴香醛,劇烈攪拌,使混合均勻.

茴香醛(對甲氧基苯甲醛)2
適用于萜烯,桉樹腦(cineoles), withanolides, 出油柑堿(acronycine)
配制方法:茴香醛:HClO4:丙酮: (1:10:20:80)

 

 

 

 

胺類物質常用的是:
1)磷鉬酸顯色劑:磷鉬酸 5%-10% 乙醇溶液,淡黃色,久置變為淺綠色,不影響使用。浸板或噴板,加熱,淺黃色背景,還原性物質顯藍綠色斑點,如果斑點太濃,可能顯深黃色。
2CAM顯色劑:鉬酸銨9.6g,硫酸鈰0.4g,10%硫酸水溶液 200ml,混勻,極淡的黃色溶液,棕色瓶密閉保存,噴板,加熱,白色背景,還原性物質顯深藍色斑點。


顯色的方法各種各樣,主要根據化合物的性質選擇不同的顯色方法。許多關于植物有效成分提取與分離的書上都有介紹,通用的有碘、硫酸乙醇、香草醛-硫酸等,當然還有許多專用的顯色劑,如:溴甲酚綠使有機酸顯黃色,三氯化鐵使酚羥基顯藍色,碘化鉍鉀使生物堿顯桔黃色.....

顯色劑化合物
苯胺鄰苯二甲酸酯 碳水化合物,糖類
溴甲酚綠羧酸
二甲氨基苯甲醛 氨基酸,多肽
磷鉬酸苯酚類
若丹明 類酯類

 

 

 

薄層層析常用顯色劑配制及顯色方法

附錄

附錄1 薄層層析及紙層析常用顯色劑配制及顯色方法

通用試劑
(1) 
重絡酸鉀-硫酸:檢查一般有機物.
噴灑劑:5重絡酸鉀溶于100毫升40%硫酸中.
薄層檢查:噴灑后加熱到150至班點出現
(2) 
熒光素-:檢查不飽和化合物
噴灑劑:0.1熒光素溶于100毫升乙醇中
溴試劑:5%的溴的四氯化碳溶液
噴灑后處理:噴灑熒光素溶液后,放置存有溴溶液的缸內,可于紫外線分析燈下檢查熒光,熒光素與溴化和成曙紅(Eosin)(無螢光),而不飽和化合物則成溴加成物,保留了原有熒光;若點樣較多,則呈黃色斑點,底板呈紅色.
(3) 
:檢查一般有機物.
 
方法:a 層析譜放密閉缸內或瓷盤內,缸內預先放有碘結晶少許,大部分有機化合物呈棕色斑點。
B
層析譜放碘蒸氣中5分鐘(或噴5%碘的氯仿溶液)取出置空氣中待過量的碘蒸氣全部揮發后,噴1%淀粉的水溶液,斑點轉成藍色。
4)硫酸:通用
噴灑劑:5%的濃硫酸乙醇溶液,或15%濃硫酸正丁醇溶液,或濃硫酸-醋酸(11

噴灑后處理:空氣中干燥15分鐘,再熱至110直至出現顏色或熒光。
5)硝酸銀-氫氧化銨(Tollen-Zaffaroni)試劑:檢查還原性物質。
溶液I : 0.1%N硝酸銀; 溶液II: 5N氫氧化銨
噴灑劑: III1:5混合(臨用前混合)
噴灑后處理: 105加熱5~10分鐘,至深黑色斑點出現.
 (6)
磷鉬酸或磷鎢酸,硅鎢酸:檢查還原性物質,類脂體,生物堿,甾體
噴灑劑: 5~10%磷鉬酸或磷鎢酸或硅鎢酸乙醇溶液
噴灑后處理: 120加熱至斑點出現.
沉淀試劑: 1硅鎢酸溶于20毫升水中,10%鹽酸至強堿性.


生物堿
  (7)
硫酸??=硫酸:檢查生物堿及含碘化合物
 
噴灑劑: 0.1硫酸?混懸于4毫升水中,加入1三氯醋酸,加熱至沸,逐滴加入濃硫酸至澄清.
 
噴灑后處理: 110加熱數分鐘至斑點出現.
  (8)
碘化鉍鉀(Dragendorff)試劑:檢查生物堿及其他含氟化合物.
溶液I: 0.85次硝酸鉍溶于10毫升冰醋酸40毫升水中
溶劑II: 8碘化鉀溶于20毫升水中.
制備液I+II,等體積混合.可用于棕色瓶中保存較長時間,一般制備液可作沉淀試劑用.
噴灑液: 制備液1毫升與2毫升醋酸,10毫升水混合即得
(9).
碘化汞鉀(Mayer)試劑: 檢查生物堿.
制備液: 13.55氯化汞和49.8碘化鉀各溶于20毫升水中,等體積混合并用水稀釋至1000毫升.
噴灑液: 制備液加1/10體積的17%鹽酸.
噴灑后處理: 觀察斑點,并于紫外線熒光分析燈下檢出.
(10) ?
酸納-濃硫酸(Mandelin)試劑:檢查生物堿.
1%>
酸納的濃硫酸溶液.與多種生物堿呈不同顏色.
(11)
碘-碘化鉀(Wagner)試劑:檢查生物堿.
1碘及10碘化鉀,
溶于50毫升水中,加熱,2毫升醋酸,再用水稀釋至100毫升.
可作紙層板顯色劑,液可作沉淀試劑.


酚類,鞣質
 (12)
三氯化鐵:檢查酚類及??.
 
噴灑劑:1~5%三氯化鐵的水溶液或乙醇溶液.并加鹽酸少許.??酸呈紅色斑點,酚類稱藍色或綠色斑點.
 (13)
鐵氰化鉀-三氯化鉀:檢查酚類,芳香胺類及還原性物質.
噴灑劑: 1%鐵氰化鉀水溶液,2%三氯化鐵水溶液.臨用前等體積混合.
噴灑后處理: 噴灑后酚性物質呈藍色斑點.再噴2N鹽酸,能使顏色加深,紙譜可用烯鹽酸洗去噴灑液.
(14) 4-
胺基安替比林-鐵氰化鉀(Emerson反應): 檢查酚類.
噴灑劑: I . 2%4-氨基安替比林乙醇溶液;
       II. 8%
鐵氰化鉀水溶液.
 
或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%鐵氰化鉀水溶液
方法: 先噴灑I,再噴灑II,即顯色,或再放入密閉缸中,缸內放25%氫氧化銨,即產生橙色至深紅色.
(15)
對氨基苯磺酸,重氮鹽(Pauly試劑): 檢查酚類,芳香胺類及能偶合的雜環化合物.
 
噴灑劑: 4.5對氨基苯磺酸,加熱溶于45毫升12N鹽酸中,用水稀釋至500毫升,10毫升稀釋液用冰冷卻,10毫升冷4.5%亞硝酸鈉水溶液,015分鐘(此試劑于0可保存3),用前加等體積1%碳酸鈉水溶液.
一般重氮化試劑,也可用聯苯胺,對硝基苯胺等.
(16)
對甲苯磺酸: 檢查甾體,黃酮,鞣質.
噴灑劑: 20%對甲苯磺酸氯仿溶液.
噴灑后處理: 100加熱數分鐘,紫外線分析燈下檢查熒光斑點.


含氧雜環及蒽醌類*

(17) 三氯化鋁: 檢查黃酮體.
噴灑1%三氯化鋁乙醇液于紫外線熒光分析燈下檢示,呈黃色熒光
(18)
堿式醋酸鉛: 檢查黃酮體.
噴灑劑: 飽和堿式醋酸鉛(或飽和醋酸鉛)水溶液.
于紫外線熒光分析燈下檢查熒光斑點.
(19)
醋酸鎂: 檢查蒽醌甙,甙元及黃酮體
噴灑劑: 0.5%醋酸鎂甲醇溶液
方法: 90加熱5分鐘,呈紅色至紫色斑點.
(20)
氫氧化鉀: 檢查香豆素,蒽醌甙及甙元
噴灑劑: 5~10%氫氧化鉀的甲醇溶液.
于日光及紫外線熒光分析燈下檢示斑點.


萜類,甾體

(21) 三氯化銻(Carr-Price試劑): 檢查甾體,萜類,皂類.
噴灑劑: 25三氯化銻溶于75氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的飽和溶液).
噴灑后處理: 100加熱5分鐘,于紫外線熒光分析燈下檢示熒光.
(22)
五氯化銻: 檢查甾體,萜類,皂甙.
噴灑劑: 五氯化銻-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新鮮配制.
噴灑后處理: 120加熱至斑點出現,并于紫外線熒光分析燈下檢示.
(23)
香蘭醛-硫酸: 檢查高級醇類,酚類,甾體,萜類,芳香油.
噴灑劑: 1香蘭素溶于100毫升濃硫酸,0.5香蘭醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1).
噴灑后處理: 室溫或120加熱觀察顯色斑點.
(24) 4-
二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.試劑): 檢查? Azulene ?前體 Proazulene.
噴灑劑: 0.254-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸585%磷酸和20毫升水的混合液中(棕色瓶中保存數月)
  ?:
烴室溫即成藍紫色斑點,>前體于80加熱10分鐘出現藍紫色斑點.
  (25)
氯胺T-三氯醋酸: 檢查強心甙.
 
噴灑劑: I. 3%氯仿T水溶液新鮮制備.
         II. 25%
三氯醋酸乙醇溶液(能保存數天).
  10
毫升I40毫升II,用前混合.
 
噴灑后處理: 110加熱7分鐘,紫外線熒光分析燈下檢示呈藍色或黃色熒光
  

服务流程

 (26) 亞硝酸基鐵氰化鈉-氫氧化鈉(Legal試劑): 檢查不飽和內酯;甲基酮或活性次甲基,常用于強心甙
噴灑劑: 1亞硝基鐵氰化鈉溶于100毫升2N氫氧化鈉-乙醇(1:1)的水溶液.
顯紅色或紫色斑點.
         (27) 3,5-
二硝基苯甲酸(Legal試劑): 檢查強心甙,α,β-不飽和內酯.
噴灑劑: 13,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氫氧化鉀50毫升.
強心甙呈紫紅色斑點.
 
糖類
(28)
鄰苯二甲基苯胺: 檢查還原糖.
 
噴灑劑: 0.93苯氨,1.66鄰苯二甲酸溶于100毫升水飽和的正丁醇中.
 
噴灑后處理: 105加熱10分鐘.
(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)
:檢查還原糖及其他還原物質。
 
溶液I4%(T.T.C.)甲醇溶液;  溶液II1N氫氧化鈉。
噴灑液:III,臨用前等體積混合。
噴灑后處理:100加熱510分鐘,得紅色斑點。
30Keller-Kiliani試劑:檢查α-去氧糖,常用于強心甙。
試液:100毫升冰醋酸加三氯化鐵試液0.5毫升混合均勻.
試樣1毫克加試液2毫克溶解后,沿試官管壁滴入濃硫酸2毫升,接觸面即顯棕色,漸變淺綠,藍色.最后冰醋酸層全部燃呈藍色.
(31) 1,3-
二羥基萘-磷酸: 檢查糖類.
噴灑液: 0.2%1,3-二羥基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,10毫升85%磷酸混合.

 

 

(32) 費林溶液(Fehling): 檢查還原糖.
溶液I: 69.3結晶硫酸銅溶于1000毫升水中.
上述二溶液如不清可濾過.臨用前等體積混合.

 
氨基酸
(33)
茚三酮: 檢查氨基酸及氨基糖.
噴灑劑: 0.3茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;0.2茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中).
噴灑后處理: 110加熱至斑點出現.
(34)
吲哚醌: 檢查氨基酸和一些肽.
噴灑劑: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸.
噴灑后處理: 100~110加熱10分鐘.
(35) 1,2-
萘醌-4-硫磺酸(Folin試劑): 檢查氨基酸.
噴灑劑: 新鮮制備0.021,2-萘醌-4-磺酸鈉,溶于100毫升5%碳酸鈉中.
噴灑后處理: 室溫放于,不同氨基酸出現不同顏色.

有機酸

(36) 酸堿指示劑: 檢查有機酸.
噴灑劑: 0.05%溴酚藍(或溴甲酚綠,或溴麝香草酚藍)的乙醇溶液.
(37)
氧化還原顯色劑: 檢查有機酸.
噴灑劑: I. 0.075%溴甲酚綠及0.025%溴酚藍的無水乙醇液.
II. 0.5%
高錳酸鉀及1%碳酸鈉.10H2O的蒸餾水液.臨用前,III1:1混合后噴酒.
噴酒后處理: 穩定時間為5~10分鐘.對不同的有機酸在紙譜上呈現不同顏色.
(38) ??? (Acridine):
檢查酸.
噴灑劑: 0.005%??乙醇溶劑.
紫外線分析燈下呈黃色熒光.
(39)
芳香胺-還原糖: 檢查酸.
噴灑劑: 芳香胺(如苯氨5)和還原糖(如木質糖5)溶于50%含水乙醇中.
噴灑后處理: 125~130加熱出現棕色斑點.

 


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